AVALIAÇÃO DA TERMO TOLERÂNCIA EM CULTURAS PRIMÁRIAS DE FIBROBLASTOS DÉRMICOS BOVINOS E BUBALINOS SUBMETIDOS A ESTRESSE TÉRMICO
Termo tolerância; HSPA1A; HSPA2; HSPA8
Altas temperaturas retira os organismos de sua zona de conforto, causando o estresse térmico e impactos negativos às células. Desse modo, temos como objetivo avaliar a expressão de genes envolvidos na termo tolerância (HSPA1A, HSPA2 e HSPA8), associando a expressão dos genes: pró-apoptótico (Bax), anti-apoptótico (Bcl2) e pro-inflamatório (IFN-γ) em cultura primaria de fibroblastos dérmicos bovinos e bubalinos submetidos a desafio térmico, por 12 horas, nos seguintes tratamentos: 0 (38,5°C/24 horas); 3 (42°C/3 horas); 6 (42°C/6 horas) e 12 (42°C/12 horas). As amostras serão avaliadas quanto a viabilidade celular, pelo teste de azul de tripano e expressão genica pelo método qRT-PCR. A expressão genica relativa será determinada pelo método 2-ΔCt, usando o GAPDH e β-actina como genes de referência, os dados serão tabulados em planilha e em seguida serão testados quanto à normalidade pelo teste Kolmogorov-Smirnov. Será aplicado um teste de significância através da ANOVA de acordo com o efeito espécie, efeito do tempo e a interação entre espécie e tempo. A comparação entre as médias será através do teste SNK. Os efeitos de tempo, quando significativos, serão avaliados através das análises de regressão linear e quadrática, com nível de significância de 0,05 Todas as análises serão feitas através do programa SAS (versão universitária).