AVALIAÇÃO DE ALTERAÇÕES GENÉTICAS E EPIGENÉTICAS NO GENE p15(INK4b) EM TUMORES MAMÁRIOS CANINOS
mutações, polimorfismos, metilação, câncer de mama, cães
O câncer é considerado o resultado do acúmulo de alterações genéticas e epigenéticas de uma célula que adquire a capacidade de se proliferar de maneira acelerada. O tumor mamário é o segundo mais frequente na espécie canina representando cerca de 52% de todos os tumores da referida espécie. Sabe-se que o câncer é decorrente de alterações nos genes que controlam o ciclo celular, tais como aqueles que codificam inibidores de cinases dependentes de ciclinas, com destaque para o gene p15(INK4b). Sabe-se que este gene sofre alterações genéticas e epigenéticas em diversos tumores humanos, inclusive o de mama. Apesar disso, pouco se sabe sobre suas alterações em tumores mamários caninos. Assim sendo, esta pesquisa tem como objetivo verificar o estado de metilação do gene p15(INK4b) bem como as alterações genéticas (mutações/polimorfismos) em tumores mamários em cadelas e correlacionar com dados histopatológicos. Serão analisadas amostras de animais submetidos a mastectomia no Hospital Veterinário da Universidade Federal Rural da Amazônia. O DNA total de cada amostra será extraído pelo método fenol-clorofórmio, e submetido à reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida de sequenciamento direto, para a análise de mutações dos éxons do gene p15(INK4b). Para a análise de metilação, o DNA será convertido utilizando o bissulfito de sódio e a região promotora do gene de interesse será analisada por Bissulfite Sequencing PCR As análises estatísticas serão realizadas no programa BioEstat 5.0, onde usaremos os testes Exato de Fisher, Qui-quadrado e Odds Ratio.