DETECÇÃO DO VÍRUS DA HEPATITE A (VHA) EM REBANHOS BOVINOS E BUBALINOS DO ESTADO DO PARÁ
Hepatite A, Região Amazônica, Bos taurus, Bubalus bubalis
A hepatite A (HAV), possui características com formato esférico de 27-28 nm com simetria icosaédrica, pode suportar altas temperaturas e baixo pH, configura-se como uma zoonose, caracterizando uma enfermidade com interface entre seres humanos e animais. As infecções estão frequentemente associadas à ingestão de alimentos ou água contaminados, sendo a principal via de transmissão a fecal-oral, relacionada diretamente a condições inadequadas de saneamento básico. Este estudo tem como objetivo identificar e caracterizar o vírus da hepatite A em rebanhos de bovinos e bubalinos do Estado do Pará. Nesse contexto, vão ser analisadas amostras sorológicas e de fígado de 400 animais, sendo 200 bovinos e 200 bubalinos provenientes de diferentes municípios do Estado do Pará, Brasil. As amostras vão ser submetidas aos procedimentos laboratoriais no Instituto Evandro Chagas (Ananindeua, Pará). Análise essas como a detecção de anticorpos totais anti-VHA será realizada pelo método ELISA, utilizando kit comercial (Symbiosys, anti-VHA SYM), baseado na competição entre anticorpos presentes nas amostras e anticorpos conjugados com peroxidase de rábano em microplacas sensibilizadas com antígeno VHA purificado. Amostras positivas serão confirmadas com a pesquisa de anticorpos anti-VHA IgM por meio do kit Bioelisa HAV IgM, que emprega a captura de anticorpos de IgM da amostra com posterior detecção do antígeno viral e conjugado enzimático. A segunda análise ocorrerá a detecção molecular do RNA viral da amostras de fígado dos bovinos e bubalinos, que serão submetidas à extração de ácidos nucleicos com o kit RNeasy (QIAGEN), seguidas de ensaios de Heminested RT-PCR, conforme protocolo do fabricante, utilizando primers específicos VHA para o gene da RNA-polimerase. Produtos amplificados de aproximadamente 338 pb serão considerados positivos. As amostras positivas serão sequenciadas bidirecionalmente com o BigDye® Terminator v3.1 (Applied Biosystems), e as sequências obtidas serão comparadas com dados do GenBank (NCBI) por meio da ferramenta BLAST. O alinhamento com sequências de isolados humanos e animais permitirá a determinação dos genótipos e subtipos circulantes, fornecendo subsídios para a compreensão da epidemiologia molecular do VHA na região estudada.