Banca de DEFESA: MARIA CREUZA NUNES CARVALHO DA SILVA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: MARIA CREUZA NUNES CARVALHO DA SILVA
DATA: 31/08/2018
HORA: 14:00
LOCAL: Auditório do ISPA
TÍTULO:

Detecção e caracterização molecular de Chlamydophila spp. em bufalas provenientes de criações no Estado do Pará

PALAVRAS-CHAVES:

Bubalino, Chlamydophila, Estado do Pará, Reprodução

PÁGINAS: 51
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Medicina Veterinária
SUBÁREA: Medicina Veterinária Preventiva
ESPECIALIDADE: Doenças Infecciosas de Animais
RESUMO:

A clamídia é um patógeno intracelular, onde todas as espécies têm o potencial de causar infecção aguda e/ou crônica. Além disso, estas as bactérias são capazes de persistir e, portanto, podem reativar uma infecção já presente e, portanto, causar infecções recorrentes. A Chlamydophila abortus, anteriormente classificada como Chlamydia psittaci sorotipo 1, vem sido descrita em muitos países estando associada principalmente com distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos. O presente estudo objetiva Avaliar a ocorrência de infecção por Chlamydophila spp. em vacas bubalinas criadas no Estado do Pará, por meio de técnica molecular. Serão selecionados 208 úteros (incluindo a cérvix) de vacas bubalinas, abatidas para consumo em um frigorífico registrado e fiscalizado pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE) da Agência de Defesa Agropecuária do Estado do Pará (ADEPARÁ) situado no município de Belém, Pará. Os dados relacionados, a cada animal: faixa etária (jovens, adultos) e procedência foram levantados junto ao SIE. O Quadro 1 apresenta a relação de animais de estudo segundo a procedência. Os úteros, cornos e cérvix dos animais selecionados para o estudo foram coletados na linha de abate e, individualmente, colocados em saco plástico que foram acondicionados em caixa de polímero expandido contendo gelo e encaminhados ao Laboratório de Patologia Animal (LABOPAT) do Instituto da Saúde e Produção Animal da Universidade Federal Rural da Amazônia (ISPA-UFRA), onde foram macroscopicamente avaliados, e em seguida procedendrá à colheita de amostras para a análise molecular. A coleta de amostras de estudo se deu por meio da utilização de suabes estéreis . Os suabes foram armazenados em torno de 4ºC em tubos de falcon contendo 3mL de solução fisiológica, identificados e separados por sacos (suabes de cérvix, úteros e amostras de tecido) até o processamento. Para a técnica de extração de DNA será utilizado o kit QIAMP DNA Stool mini kit (da Qiagem), conforme instruções do fabricante; através da técnica descrita por Sambrook et al. (1989). O DNA genômico de Chlamydophila isolada foi extraído dessas amostras utilizando-se um método previamente descrito. As análises foram feitas por PCR convencional onde se esperou encontrar o gene OMP 2 para identificação molecular da família Chlamydiaceae. Todas as reações foram realizadas em um termociclador Bio-Rad modelo CFX96 (Real-Time PCR Detection System, Singapura, Ásia), , em volumes de reação de 25μl contendo 200mm de cada dNTP, 1μl de 10X Tampão de PCR com MgCl₂ 15 mm, 1,25U de ADN polimerase Taq (Hoffmann-La Roche Diagnostics, Mannheim, Alemanha), 5 pmol de cada iniciador e 5μl de modelo.  As condições de amplificação para os iniciadores Ch1 (5' ATG TCC AAA CTC ATC AGA CGA G 3') e Ch2 (5' CCT TCT TTA AGA GGT TTT ACC CA 3'). ,Para a amplificação foi realizado o protocolo sob as seguintes condições: 2,5μl de Tampão 1X, 1,0 μl de dNTPS 200mm; 0,8 μl de  1,5 mm de MgCl₂; 1,0 μl de cada primer a 10 μm (forward e reverse); 0.8 μl de Taq DNA polimerase 5U (Ludwig, Ver de que país é), 16,9μl dH₂O e 1.0 μl de DNA. As condições de temperatura e tempo da PCR foram de 5 min. inicialmente a 95ºC e 35 ciclos de 94ºC por 1 min, 55ºC  por 1 min. e 72ºC  por 1 min, finalizando com 7min. a 72ºC. O volume final de reação em cadeira da polimerase (PCR) para o par de primer foi de 25μl nos protocolos realizados. O produto da PCR será visualizado em gel de agarose à 1,5%. O controle negativo consistiu em alíquotas de água ultrapura estéril.

MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 2494981 - ADRIANA MACIEL DE CASTRO CARDOSO
Externo ao Programa - 1368855 - RINALDO BATISTA VIANA
Externo à Instituição - SANDRO PATROCA DA SILVA - NENHUMA
Externo ao Programa - 2495071 - SEBASTIAO TAVARES ROLIM FILHO
Presidente - 388501 - WASHINGTON LUIZ ASSUNCAO PEREIRA