Banca de DEFESA: FABIANO MELO DE BRITO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: FABIANO MELO DE BRITO
DATA: 29/08/2016
HORA: 14:30
LOCAL: ICB-UFPA
TÍTULO:

EXPRESSÃO HETERÓLOGA DE UMA PROTEÍNA TRANSPORTADORA DE LIPÍDIOS DE Piper nigrum L (PnLTP) CONFERINDO TOLERÂNCIA AO ESTRESSE SALINO EM Escherichia coli

PALAVRAS-CHAVES:

Estresses abiotico e biótico; Expressão heteróloga em sistema bacteriano, Fusariose, Pimenteira-do-reino, Proteína recombinante, Proteína transportadora de lipídeos

PÁGINAS: 55
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
SUBÁREA: Fitossanidade
ESPECIALIDADE: Fitopatologia
RESUMO:

As plantas respondem a nível fisiológico, bioquímico e molecular a diferentes tipos de estresses abióticos e bióticos. Ao nível molecular, é conhecido que algumas proteínas podem atuar na resposta da planta a ambos os tipos de estresse, entre elas estão as proteínas transportadoras de lipídeos (LTP, de Lipid Transfer Protein). Recentemente foi isolado o gene PnLTP, com expressão diferencial durante a interação da pimenteira-do-reino (Piper nigrum L.) com o patógeno Fusarium solani f. sp. piperis, causador da doença podridão da raiz ou fusariose. Consumida mundialmente como condimento, a pimenta-do-reino possui grande importância socioeconômica no atual cenário agrícola, sendo o Brasil um dos maiores produtores mundiais, e o Estado do Pará o maior produtor nacional. Dentre as limitações enfrentadas pela pipericultura brasileira, a fusariose vem se tornando o maior entrave no setor produtivo desta cultura. Neste contexto são essenciais estudos que visem a caracterização da PnLTP. Desta forma, o objetivo principal do presente trabalho é realizar a clonagem e expressão PnLTP em sistema bacteriano e avaliar o efeito da proteína recombinante nas células bacterianas submetidas ao estresse salino. A seqüência codificante da PnLTP foi inserida no vetor de expressão pET29a nos sítios das enzimas de restrição NdeI e XhoI, gerando a construção pET29a-PnLTP, a qual foi introduzida em células de Escherichia coli (linhagem BL21DE3 Rosetta). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG (Isopropil-tio-β-D-galactosídeo), e confirmada por meio de análises eletroforéticas em gel de poliacrilamida desnaturante (SDS-PAGE) que revelaram uma banda adicional de aproximadamente 12 kDa presente em extratos protéicos totais de células bacterianas transformadas com a construção pET29a-PnLTP, em comparação com a amostra controle (extrato protéico total de bactérias transformadas com o vetor pET29a, sem inserto). A expressão da PnLTP recombinante foi analisada nos tempos de 0, 1, 2 ,3, 4, 6, 8, 12 e 24 horas de indução, sendo que a banda com maior intensidade foi observada na amostra com 6 horas de indução. Na análise funcional in vivo da PnLTP, o crescimento de células bacterianas expressando esta proteína submetidas a diferentes concentrações de cloreto de sódio (0, 250, 500 e 750 mM) foi monitorado por medidas de absorbância a 600 nanômetros. Nossos resultados revelaram que a proteína recombinante PnLTP conferiu uma função de proteção contra o estresse abiótico nas  células bacterianas, reforçando a importância de experimentos adicionais de avaliação da fração purificada da PnLTP recombinante em inibir o crescimento do F. solani f. sp. piperis.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 409.858.651-72 - CLAUDIA REGINA BATISTA DE SOUZA - UFPA
Interno - 1521814 - HUGO ALVES PINHEIRO
Externo à Instituição - SAVIO PINHO DOS REIS - UEPA
Externo à Instituição - ROBERTO LISBOA CUNHA - EMBRAPA