Banca de QUALIFICAÇÃO: FABIANO MELO DE BRITO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: FABIANO MELO DE BRITO
DATA: 27/11/2015
HORA: 14:30
LOCAL: Instituto de Ciências Biológicas - UFPA
TÍTULO:

Clonagem molecular, expressão heteróloga, purificação e análise funcional de uma proteína transportadora de lipídeos de Piper nigrum L.

PALAVRAS-CHAVES:

Expressão heteróloga em sistema bacteriano, Fusariose, Pimenteira-do-reino, Proteína recombinante, Proteína transportadora de lipídeos

PÁGINAS: 60
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
SUBÁREA: Fitossanidade
ESPECIALIDADE: Fitopatologia
RESUMO:

Consumida mundialmente como condimento, a pimenta-do-reino (Piper nigrum L.) possui grande importância sócio-econômica no atual cenário agrícola, sendo o Brasil um dos maiores produtores mundiais, e o Estado do Pará o maior produtor nacional. Dentre as limitações enfrentadas pela pipericultura brasileira, a doença podridão das raízes causada pelo fungo Fusarium solani f. sp. piperis, conhecida também como fusariose, vem se tornando o maior entrave no setor produtivo da pimenta-do-reino. Neste contexto, estudos moleculares visando o entendimento desta interação planta-patógeno podem contribuir para o estabelecimento de estratégias biotecnológicas para o controle da fusariose. Estudos prévios de expressão gênica diferencial em plantas de pimenteira-do-reino infectadas com o F. solani f. sp. piperis identificaram uma seqüência gênica codificando uma proteína da família de proteínas transportadoras de lipídeos (LTPs), conhecidas por apresentarem ação antimicrobiana, incluindo atividade antifúngica. Desta forma, o objetivo principal do presente trabalho é realizar a clonagem e expressão da LTP de pimenteira-do-reino (PnLTP) em sistema bacteriano e avaliar a  capacidade da proteína recombinante em inibir o crescimento do fungo F. solani f. sp. piperis. A seqüência codificante da PnLTP foi inserida no vetor de expressão pET29a nos sítios das enzimas de restrição NdeI e XhoI, gerando a construção pET29a-PnLTP, a qual foi introduzida em células de Escherichia coli (linhagem  BL21DE3 Rosetta). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG (Isopropil-tio-β-D-galactosídeo), as células bacterianas foram lisadas por meio de congelamento e descongelamento e os extratos protéicos totais foram solubilizados em PBS (Phosphate Buffer Saline). A expressão da PnLTP recombinante foi confirmada por meio de análises eletroforéticas em gel de poliacrilamida desnaturante (SDS-PAGE) que revelaram uma banda adicional de aproximadamente 12 kDa presente em extratos protéicos totais de células bacterianas transformadas com a construção pET29a-PnLTP, em comparação com a amostra controle (extrato protéico total de bactérias transformadas com o vetor pET29a, sem inserto). A expressão da PnLTP recombinante foi analisada nos tempos de 0, 1, 2 ,3, 4, 6, 8, 12 e 24 horas de indução, sendo que a banda com maior intensidade foi observada na amostra com 6 horas de indução. A PnLTP recombinante contendo a cauda de histidina (6xHis) na extremidade carboxi-terminal foi purificada por meio  de cromatografia de afinidade em coluna de níquel. Os ensaios de inibição do crescimento do fungo estão sendo conduzidos.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 409.858.651-72 - CLAUDIA REGINA BATISTA DE SOUZA - UFPA
Externo ao Programa - 1432825 - BARBARA DO NASCIMENTO BORGES
Externo à Instituição - SAVIO PINHO DOS REIS - UEPA
Externo à Instituição - EVONNILDO COSTA GONÇALVES - UFPA